Q1：您知道如何更加高效快速做好肽圖實(shí)驗(yàn)嗎？
A：UHPLC配合小粒徑核-殼技術(shù)色譜柱可對(duì)抗體酶解后的大量色譜峰實(shí)現(xiàn)良好的分離。優(yōu)異的保留時(shí)間重復(fù)性完全滿(mǎn)足樣品特性和變異檢測(cè)時(shí)進(jìn)行洗脫峰的比較需求
HPLC肽圖分析是蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)研究中極為重要的手段之一，不但可以比較重組與天然蛋白質(zhì)結(jié)果之間的同一性，確認(rèn)基因工程上游和下游處理過(guò)程中是否發(fā)生差錯(cuò)、重組產(chǎn)物中是否存在翻譯后修飾及未預(yù)期氨基酸的變異等，而且不同批次產(chǎn)品的肽譜比較可驗(yàn)證工藝過(guò)程的穩(wěn)定性。因此，肽圖分析在生物技術(shù)藥物質(zhì)控中尤為重要。
目前肽圖分析常用方法主要是胰蛋白酶切RP-HPLC方法。蛋白樣品經(jīng)酶解后進(jìn)入HPLC，進(jìn)行色譜分離，保留時(shí)間不同的肽段依次進(jìn)入紫外檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。
島津的相關(guān)液相產(chǎn)品，例如Nexera-i系列、LC-40以及生物惰性兼容液相Nexera Bio均可實(shí)現(xiàn)蛋白類(lèi)藥物的HPLC肽圖分析。
蛋白類(lèi)藥物肽圖分析
A：島津生物惰性兼容液相Nexera Bio系統(tǒng)，更耐腐蝕，而且能減少生物大分子的吸附保證生物大分子的完整性，有效保障分析重復(fù)性。
電荷異構(gòu)體的存在將會(huì)影響到蛋白質(zhì)藥物的活性、結(jié)合能力、藥代動(dòng)力學(xué)、免疫原性及結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性，從而影響藥物有效性、安全性及保質(zhì)期。同時(shí)，電荷異質(zhì)性的控制程度也反映了重組蛋白類(lèi)藥物生產(chǎn)工藝的一致性。因此，在生物類(lèi)似藥的研發(fā)及與原研藥的一致性評(píng)價(jià)研究中，電荷異質(zhì)性是工藝質(zhì)量控制的重要因素。
為了最大限度地降低蛋白質(zhì)與固定相填料的離子相互作用及二者之間可能存在的吸附作用，電荷異質(zhì)性分析通常使用高離子強(qiáng)度的流動(dòng)相，并且采用堿性或酸性分析條件。但是，高離子強(qiáng)度流動(dòng)相和堿性/酸性分析條件給液相色譜儀的耐腐蝕性和系統(tǒng)穩(wěn)定性帶來(lái)嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。
ATP分析
對(duì)ATP進(jìn)行分析并比較峰強(qiáng)度（面積），Nexera Bio表現(xiàn)出5倍的信號(hào)強(qiáng)度優(yōu)勢(shì)
蛋白類(lèi)生物藥電荷異質(zhì)體分析
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| 圖1：鹽梯度方法中貝伐單抗生物仿制藥的電荷異質(zhì)體分布 | 圖2：鹽梯度方法中貝伐單抗生物仿制藥的6次分析UHPLC-UV(280nm）色譜圖 |
Q3：如何輕松掌握抗體唾液酸定量分析的細(xì)節(jié)？
A3：島津開(kāi)發(fā)了UHPLC測(cè)定抗體中唾液酸的分析方法，該方法分析快、重復(fù)性好、靈敏度高，適合用于抗體類(lèi)藥物中唾液酸含量的分析。
糖基化是蛋白質(zhì)的一種重要翻譯后修飾，糖基分析主要包含唾液酸含量測(cè)定、單糖組成分析、糖基化位點(diǎn)測(cè)定、糖鏈結(jié)構(gòu)測(cè)定等。
唾液酸含量的測(cè)定是先將唾液酸從糖鏈上解離成游離狀態(tài)，再進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)實(shí)現(xiàn)衍生化，通過(guò)測(cè)定衍生化產(chǎn)物從而測(cè)定唾液酸含量，常用的方法有間苯二酚顯色法和HPLC法。間苯二酚顯色法是利用間苯二酚將游離的唾液酸進(jìn)行衍生生成有色化合物，再用紫外分光光度法測(cè)定其含量；HPLC法是利用鄰苯二胺（OPD）對(duì)唾液酸進(jìn)行衍生，然后用帶紫外檢測(cè)器的HPLC或者LC-MS/MS進(jìn)行定量。
 Neu5Ac結(jié)構(gòu)圖
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 Neu5Gc結(jié)構(gòu)圖
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蛋白類(lèi)生物藥糖型分析
A4：島津利用Nexera Bio 生物兼容液相色譜系統(tǒng)和Shim-pack Bio生物惰性尺寸排阻色譜柱，實(shí)現(xiàn)了注射用重組人白介素-11、FC融合蛋白、貝伐單抗體生物類(lèi)似藥和阿達(dá)木單抗中聚集體的分析。在保證生物大分子的完整性、有效保障分析重復(fù)性的同時(shí)，為蛋白類(lèi)藥物低聚體分析提供快速、高效的SEC方法。
蛋白質(zhì)藥物在其生產(chǎn)、貯藏、運(yùn)輸、銷(xiāo)售以及用藥過(guò)程中由于外力因素的作用可能會(huì)產(chǎn)生聚集。蛋白質(zhì)聚集現(xiàn)象會(huì)導(dǎo)致蛋白藥活性和其在藥品中的濃度降低，并可能產(chǎn)生有害的毒理學(xué)作用和免疫應(yīng)答，甚至發(fā)生危及生命的藥物反應(yīng)。FDA關(guān)于聚集體的指導(dǎo)原則中就指出蛋白聚集體在人體內(nèi)極易產(chǎn)生免疫原性。
對(duì)于常見(jiàn)的蛋白質(zhì)低聚體（二聚~四聚體），非還原型聚丙烯酰胺凝膠電泳（ SDS-PAGE ）需要在變性條件下進(jìn)行，一般會(huì)影響多聚體的檢測(cè)。而體積排阻色譜法（SEC）條件溫和，不會(huì)對(duì)蛋白的形態(tài)產(chǎn)生較大的影響。因此，SEC法能較準(zhǔn)確地檢測(cè)蛋白質(zhì)中的低聚體，是蛋白質(zhì)藥物開(kāi)發(fā)、質(zhì)量控制和穩(wěn)定性研究中常用的聚集體分析方法。
大小變異體，聚體分析
應(yīng)用案例：?jiǎn)慰顾幬锞奂w分析，推薦生物惰性液相
A5：島津利用性能優(yōu)異的液相色譜自動(dòng)進(jìn)樣器，可完成進(jìn)樣器內(nèi)氨基酸自動(dòng)柱前衍生并在線(xiàn)進(jìn)行HPLC分析，從而實(shí)現(xiàn)氨基酸樣品的自動(dòng)、高效分析。
作為細(xì)胞生長(zhǎng)的環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)來(lái)源，培養(yǎng)基的性能很大程度上決定了細(xì)胞密度和表達(dá)產(chǎn)物的產(chǎn)量和質(zhì)量，因此培養(yǎng)基是工藝開(kāi)發(fā)最重要的環(huán)節(jié)之一。其中，在生產(chǎn)工藝優(yōu)化和確認(rèn)過(guò)程中，以及QC過(guò)程中，細(xì)胞上清液中氨基酸含量的監(jiān)測(cè)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)有著重大的意義。但是，離線(xiàn)衍生后使用HPLC分析，以及HPLC柱后衍生法檢測(cè)氨基酸等方法，不僅耗時(shí)耗力，并且對(duì)結(jié)果準(zhǔn)確度影響較大。因此，開(kāi)發(fā)操作簡(jiǎn)單、高效穩(wěn)定的分析方法，對(duì)氨基酸組成分析非常有意義。
24種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖（雙波長(zhǎng)同時(shí)檢測(cè)）
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