由于藥物雜質(zhì)需要嚴(yán)格控制以確保安全性，因此開(kāi)發(fā)高度可靠的分析方法至關(guān)重要。在方法開(kāi)發(fā)過(guò)程中，隨著分析方法的變化，藥物及其雜質(zhì)的保留時(shí)間也發(fā)生著變化，如何能準(zhǔn)確快速的對(duì)其進(jìn)行追蹤，很大程度上影響著方法開(kāi)發(fā)的效率。利用LabSolutions MD方法開(kāi)發(fā)軟件高效的自動(dòng)峰追蹤功能，可通過(guò)包括質(zhì)譜信息在內(nèi)的多種條件快速準(zhǔn)確定位目標(biāo)峰，無(wú)需依賴(lài)直覺(jué)或者經(jīng)驗(yàn)，并節(jié)省大量的時(shí)間。
分析示例
孟魯司特及其雜質(zhì)的分析方法開(kāi)發(fā)
目標(biāo)1：構(gòu)建“設(shè)計(jì)空間”可視化評(píng)估不同梯度參數(shù)對(duì)孟魯司特每種雜質(zhì)的分離度的影響。
目標(biāo)2：準(zhǔn)確跟蹤多個(gè)具有相似紫外光譜的雜質(zhì)。
目標(biāo)3：尋找具有出色分離度的同時(shí)又能縮短分析時(shí)間的方法。
一、分析條件
通過(guò)最終梯度濃度和梯度程序的斜率，研究孟魯司特及其雜質(zhì)的分離度變化。
最終梯度濃度:75%，80%，85% (共3種，增量5%)
梯度程序斜率:8分鐘，13分鐘，18分鐘 (共3種，增量5分鐘)
二、使用質(zhì)譜檢測(cè)器進(jìn)行高效峰跟蹤
由于6種雜質(zhì)之間的紫外光譜具有很高的相似度，基于紫外光譜的峰跟蹤將會(huì)很困難。如圖1所示，Imp1和Imp6(相似性>0.99) 、Imp2和lmp4(相似性>0.9)以及Imp3和Imp5 (相似性>0.999)。LabSolutions MD 可使用LCMS-2050單四級(jí)桿質(zhì)譜檢測(cè)器實(shí)現(xiàn)基于m/z的峰跟蹤，能夠準(zhǔn)確識(shí)別具有相似紫外光譜的雜質(zhì) (圖2)
圖2顯示了在最終梯度濃度為80%和梯度斜率分別為18分鐘和8分鐘下獲得的LC色譜圖，通過(guò)m/z成功追蹤到保留時(shí)間發(fā)生變化的對(duì)應(yīng)雜質(zhì)(lmp1至6)。
三、利用設(shè)計(jì)空間進(jìn)行可視化評(píng)估
為了確定最佳分析條件，當(dāng)最終濃度和梯度斜率發(fā)生變化時(shí)，通過(guò)設(shè)計(jì)空間將分離度可視化。圖3顯示了孟魯司特和Imp1的分離度設(shè)計(jì)空間。紅色區(qū)域表示較高的分離度，藍(lán)色區(qū)域表示較低的分離度。該設(shè)計(jì)空間可直觀(guān)的顯示:本示例中較低的最終濃度和較長(zhǎng)的梯度斜率可以實(shí)現(xiàn)更好的分離。
更重要的是，LabSolutions MD 可以通過(guò)疊加設(shè)計(jì)空間來(lái)簡(jiǎn)化對(duì)最佳分析條件的搜索。例如，希望方法同時(shí)符合多個(gè)響應(yīng)目標(biāo):1.孟魯司特和Imp1分離度>2.6，2.每種化合物的最小分離度>1.2，3.最后洗脫峰 (mp6) 的RT<17分鐘。圖4中黑色陰影區(qū)域是滿(mǎn)定所有目標(biāo)的區(qū)域。分析時(shí)間最短的最佳點(diǎn)位于點(diǎn)A 附近，該點(diǎn)以紅色圈出。
如此，通過(guò)疊加分離度和最后一個(gè)峰洗脫時(shí)間的設(shè)計(jì)空間，可以輕松找到提供同時(shí)滿(mǎn)足足夠分離度和更短分析時(shí)間的最佳條件。另外，通過(guò)設(shè)計(jì)空間可以輕松了解LC參數(shù)是如何影響分離度和保留時(shí)間等響應(yīng)結(jié)果的，這意味著可以在不依賴(lài)方法開(kāi)發(fā)人員經(jīng)驗(yàn)的情況下找到可靠的方法。
四、最佳條件下的色譜圖
在最佳條件下 (A點(diǎn)) 獲得的色譜圖如圖5所示。該條件下，孟魯司特和Imp1的分離度為2.7，每種雜質(zhì)的最小分離度為1.4(Imp3)，最后洗脫峰的保留時(shí)間小于17 min，成功滿(mǎn)足目標(biāo)。
總結(jié)
使用 LabSolutions MD和 LCMS2050對(duì)藥物雜質(zhì)進(jìn)行高效方法開(kāi)發(fā)。基于m/z的峰跟蹤即使在相似的紫外光譜下也能準(zhǔn)確識(shí)別每種雜質(zhì)。
LabSolutions MD可視化的設(shè)計(jì)空間疊加功能，無(wú)論用戶(hù)經(jīng)驗(yàn)如何，都可以輕松開(kāi)發(fā)更有效(分離度) 和更快速 (分析時(shí)間) 的分析方法。
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