【導(dǎo)讀】
近期，諾和諾德公司在Clinicaltrials.gov網(wǎng)站上注冊(cè)了4種司美格魯肽口服制劑的Ⅰ?期臨床試驗(yàn)。緊接著，該公司又宣布了口服司美格魯肽近萬(wàn)名受試者的SOUL臨床Ⅲ期試驗(yàn)的核心成果。司美格魯肽，這一革命性的長(zhǎng)效胰高糖素樣肽-1（GLP-1）類(lèi)似物，憑借臨床與醫(yī)美市場(chǎng)的成功，其仿制與改良制劑的研發(fā)一直處于加速推進(jìn)的狀態(tài)。在藥物研發(fā)的復(fù)雜過(guò)程中，對(duì)司美格魯肽在生物樣本中的精確定量分析，是處方優(yōu)化、臨床給藥方案制定及仿制藥一致性評(píng)價(jià)的關(guān)鍵支撐，而體內(nèi)高靈敏度的痕量分析，又是洞察藥物藥代與藥效學(xué)特性、優(yōu)化處方設(shè)計(jì)、個(gè)性化用藥的基礎(chǔ)。鑒于此，研發(fā)領(lǐng)域的專(zhuān)家對(duì)更靈敏、更高效的司美格魯肽體內(nèi)分析方法的探索與追求從未停止。
▍多肽藥物分析難點(diǎn)
司美格魯肽為GLP-1類(lèi)似物，屬于多肽類(lèi)藥物，由于其分子結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)，如含有多個(gè)氨基酸殘基和復(fù)雜的立體結(jié)構(gòu)，使得在生物樣本中的定量分析變得異常困難。常見(jiàn)的問(wèn)題包括：
● 痕量存在：司美格魯肽在生物樣本中，常呈痕量存在，且生物樣本基質(zhì)復(fù)雜、干擾物質(zhì)多，傳統(tǒng)檢測(cè)方法靈敏度不足，易致檢測(cè)結(jié)果偏差或漏檢，難以準(zhǔn)確反映其體內(nèi)真實(shí)含量。
● 非特異性吸附：在色譜分析過(guò)程中，多肽類(lèi)藥物可能會(huì)在制備與分析過(guò)程中發(fā)生非特異性吸附，這不僅影響峰形，還可能導(dǎo)致定量結(jié)果的偏差。
● 高殘留：多肽類(lèi)藥物在色譜系統(tǒng)中的殘留會(huì)導(dǎo)致信號(hào)干擾，影響后續(xù)樣品的分析。
● 低回收率：在樣品前處理階段，多肽類(lèi)藥物（如司美格魯肽）容易與生物樣本中的蛋白質(zhì)發(fā)生結(jié)合，加之離子交換能力不足，導(dǎo)致在提取過(guò)程中目標(biāo)分子的損失，進(jìn)而影響定量分析的準(zhǔn)確性。
● 高背景干擾：生物樣本的復(fù)雜性導(dǎo)致質(zhì)譜分析時(shí)背景噪聲顯著增加，這可能會(huì)掩蓋藥物信號(hào)，從而影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。
【島津解決方案】
在多肽類(lèi)藥物分析領(lǐng)域，島津通過(guò)采用生物惰性液相特色機(jī)種、系統(tǒng)優(yōu)化LC-MS/MS檢測(cè)方法，成功克服了上述挑戰(zhàn)，實(shí)現(xiàn)了生物樣本中司美格魯肽的皮摩爾（pmol）級(jí)痕量定量。
1. 低殘留的分析效果：面對(duì)多肽類(lèi)藥物的非特異性吸附問(wèn)題，實(shí)驗(yàn)采用島津新型Nexera XS inert生物惰性液相色譜儀，充分發(fā)揮全流路無(wú)金屬暴露的硬件特性，在千倍寬線(xiàn)性范圍、皮摩爾（pmol）級(jí)定量下限的檢測(cè)需求下，有效降低了司美格魯肽在系統(tǒng)中的殘留，減少了非特異性吸附，從而提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性，輕松解決吸附殘留問(wèn)題。
A B
圖1. 系統(tǒng)殘留考察空白樣品色譜圖（A：普通液相結(jié)果；B：惰性液相結(jié)果）
2. 皮摩爾（pmol）級(jí)的定量下限：通過(guò)系統(tǒng)優(yōu)化液相和質(zhì)譜參數(shù)，顯著提高LCMS-8050質(zhì)譜儀分析的選擇性和靈敏度，使得LCMS-8050定量下限達(dá)到皮摩爾（pmol）級(jí)，為生物樣本中司美格魯肽痕量分析帶來(lái)新的突破，提高儀器使用性?xún)r(jià)比。
3. 高效的回收：為破壞司美格魯肽與生物樣本中的蛋白質(zhì)所發(fā)生的結(jié)合、提高極性肽分子的保留能力，實(shí)驗(yàn)采用蛋白沉淀與優(yōu)化后的固相萃取相結(jié)合的前處理方法。這種綜合提取方法能夠有效地從蛋白質(zhì)結(jié)合狀態(tài)中釋放司美格魯肽，并提高其在SPE過(guò)程中的保留，使得司美格魯肽的回收率提高到90%以上，顯著提升了分析結(jié)果的靈敏度。
表1. 方法回收率結(jié)果(n=6)
對(duì)于司美格魯肽為代表的GLP-1多肽藥物分析，我們要對(duì)樣品前處理方法、制備過(guò)程所用耗材材質(zhì)、LC-MS/MS儀器設(shè)備與方法參數(shù)進(jìn)行充分考量與優(yōu)化，獲得高回收率、高靈敏度、高準(zhǔn)確度及低殘留的檢測(cè)方法，從而推動(dòng)多肽類(lèi)藥物研發(fā)的進(jìn)程，也為臨床治療提供重要的科學(xué)依據(jù)。我們期待與更多的研究人員和臨床醫(yī)生合作，共同探索多肽類(lèi)藥物分析的新境界。
【結(jié)語(yǔ)】
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